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SDS-PAGE胶制备

来源:化工产品网-原创 发布时间:2024-01-03 18:53:27
SDS-PAGE胶制备

SDS-PAGE胶是一种常用的蛋白质电泳分离技术,用于分离和鉴定蛋白质样品中的不同成分。本文将介绍SDS-PAGE胶的制备方法。

制备SDS-PAGE胶的材料包括:丙烯酰胺、N,N'-甲撑二丙烯酰胺、三甲基丙烯酰氨基甲基丙烯酸、过硫酸铵、TEMED和SDS-PAGE胶缓冲液。首先,将SDS-PAGE胶缓冲液溶解在去离子水中,并加入适量的过硫酸铵和TEMED,混合均匀后静置待用。

接下来,制备分离胶和堆积胶。分离胶的配方为:30%丙烯酰胺、0.8%N,N'-甲撑二丙烯酰胺、0.1%三甲基丙烯酰氨基甲基丙烯酸、10%SDS、0.25M Tris-HCl缓冲液(pH 8.8)和去离子水。堆积胶的配方为:5%丙烯酰胺、0.13%N,N'-甲撑二丙烯酰胺、0.03%三甲基丙烯酰氨基甲基丙烯酸、10%SDS、0.125M Tris-HCl缓冲液(pH 6.8)和去离子水。将材料按照配方加入到两个不同的容器中,并混合均匀。

将分离胶倒入SDS-PAGE胶板的上部,直到液面与胶板顶部齐平。待分离胶凝固后,将堆积胶倒入胶板的下部,直到液面与分离胶顶部齐平。在胶液表面加上适量的去离子水,防止胶液表面干燥。

待SDS-PAGE胶凝固后,即可进行蛋白质的电泳分离。将样品加入到胶槽中,加上电泳缓冲液,接通电源,进行电泳分离。分离完成后,将胶板取出,进行染色和成像,即可获得蛋白质的分离图谱。

以上就是SDS-PAGE胶制备的详细过程。制备SDS-PAGE胶需要注意的是,所有材料和设备都必须消毒干净,以避免污染导致实验失败。同时,制备过程中需要保持操作环境干净整洁,以确保实验的准确性和可靠性。


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