GAPDH上、下游引物(10ΜM)(REALTIME-PCR,人)

GAPDH是一种重要的基因，被广泛用于实时荧光定量PCR（realtime-PCR）中作为内参基因。在进行realtime-PCR实验时，需要设计合适的引物来扩增GAPDH基因，使其达到最佳扩增效果。本文将介绍GAPDH上、下游引物的设计过程。

首先，我们需要获取GAPDH基因的序列。通过NCBI数据库查询，可以获得人类GAPDH基因的全长序列。在此基础上，我们利用Primer3软件进行引物设计。对于上游引物，我们需要考虑其位置在GAPDH基因序列的哪个位置，通常选择在基因的5'端。同时，引物长度应该在18-22个核苷酸之间，GC含量应该在40%-60%之间，避免引物自身的结构影响扩增效果。在此基础上，我们选择了一对适合的上游引物，其序列为5'-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'。

对于下游引物，我们需要选择其位置在GAPDH基因序列的哪个位置，通常选择在基因的3'端。同样，引物长度应该在18-22个核苷酸之间，GC含量应该在40%-60%之间，避免引物自身的结构影响扩增效果。在此基础上，我们选择了一对适合的下游引物，其序列为5'-TGATGGCAACAATCTCCACCA-3'。

通过实验验证，我们发现这一对上、下游引物可以很好地扩增GAPDH基因，并且在realtime-PCR实验中表现稳定可靠。这对于GAPDH作为内参基因的应用具有重要的意义。同时，这一引物设计过程也可以为其他基因的引物设计提供参考。