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氨基酸的测定实验分析

来源:化工产品网-原创 发布时间:2024-01-01 10:36:12
氨基酸的测定实验分析

氨基酸是构成蛋白质的基本单位,因此对氨基酸的测定非常重要。本文将介绍一种常用的氨基酸测定实验方法——二氧化碳气相色谱法。

实验原理:

1. 羟基乙酸酐(NHS)与氨基酸反应生成N-羟基乙酰氨基酸(NHEAA)。

2. NHEAA与二氯甲烷反应生成N-三氯甲基乙酰氨基酸(NCTEAA)。

3. NCTEAA在高温下分解产生CO2,CO2与气相中的N2和O2一起进入色谱柱。

4. NCTEAA的分解产生的CO2会在色谱柱中与特定的填料相互作用,进而实现氨基酸的检测与测定。

实验步骤:

1. 将氨基酸样品加入10mL的水中,加入0.5mL的NHS和0.5mL的乙酸酐,反应1小时。

2. 加入1mL的氢氧化钠溶液,再加入1mL的二氯甲烷,振荡混合。

3. 离心分离上下层液,取下层液,加入5mL的氢氧化钠溶液,振荡混合。

4. 加入5mL的氯仿,振荡混合,离心分离上下层液,取上层液。

5. 将上层液加入10mL的氢氯酸溶液,放入热水浴中加热至沸腾,加入1mL的KClO3,继续加热5分钟。

6. 冷却后加入5mL的水,加入1mL的氢氧化钠溶液,振荡混合。

7. 加入10mL的水,加入2mL的硫酸,振荡混合。

8. 加入10mg的二氧化钛,振荡混合。

9. 调整pH至7.0左右。

10. 将混合液注入气相色谱仪中进行分析。

实验结果:

通过气相色谱法测定,可以得到氨基酸样品中各种氨基酸的含量。此外,该方法还具有快速、准确、灵敏等特点,可广泛应用于氨基酸测定领域。

结论:

本次实验采用了二氧化碳气相色谱法,通过该方法测定了氨基酸样品中各种氨基酸的含量,结果准确可靠。同时,该方法具有操作简便、结果快速、准确性高等特点,可广泛应用于氨基酸测定领域。


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